这种办法能够检测和定量组成类mRNA中大大都润饰的核苷。这不只包含在体外转录过程中有意经过三磷酸盐引进的润饰，还包含商业化NTP质料改变引进的杂质，核苷被氧化发生的杂质等。该办法还能检测从帽结构开释的m7G或核糖甲基化润饰。运用LC-MS/MS，能够在核苷水平上剖析mRNA，从而在单次运转中检测和量化数十种不同的润饰核苷。该办法能够很容易地对体外转录的NTP进行质量操控。

  用0.6U的核酸酶P1、0.2U的蛇毒磷酸二酯酶、0.2U的牛肠磷酸酶和10U的Benzonase核酸酶，在5mM Tris （pH8）和1mM氯化镁溶液中，37℃酶解2小时，将10μg的RNA酶切至核苷水平。别的，能够挑选性地增加脱氨酶抑制剂，如喷司他汀（腺苷脱氨酶抑制剂，200ng）和四氢尿苷（胞苷脱氨酶抑制剂，500ng），以避免核苷降解。

  ESI参数：气体温度300℃，气体流量7L/min，雾化器压力60psi，鞘气温度400°C，鞘气流量12L/min，毛细管电压3000v，喷嘴电压0v

  QQQ参数：取决于有必要检测的润饰核苷。主张对每台质谱仪的仪器参数（破碎器、磕碰能量、加快器电压）来优化，以到达最佳灵敏度

  润饰核苷的量用腺苷校对，以消除进样量不同带来的差异。为此，从254nm处记载的紫外色谱中获取腺苷的峰面积。

  润饰核苷的量用腺苷校对，以消除进样量不同带来的差异。为此，从254nm处记载的紫外色谱中提取腺苷的峰面积。

  运用外部校准溶液进行肯定定量。预备浓度为0.1、0.5、1、5、10、50、100和500nM的校准溶液，用于MS/MS检测批改，每个润饰含有等量的内标。

  每种稀释液注入10μL，在1-5000fmol范围内进行校准。关于腺苷，预备浓度为0.1、1、10和100fmol的校准溶液。每种稀释液注入5μL，在0.5-500pmol范围内进行校准。呼应因子对应于校准曲线线性拟合的斜率（峰面积对应于各自的量）。

  或许，能够再一次进行挑选另一种主核苷（C、U或G）进行归一化。避免在酶促聚腺苷酸化的情况下，导致不知道数量的腺苷。

  使用事例 HT8840便携式高精度温室气体剖析仪使用于水域体系CH4排放量观测项目

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